中華人民共和國國家標準
醫(yī)藥工業(yè)潔凈室（區(qū)）沉降菌的測試方法
Test method for airborne paricles in clean room（area） of the pharmaceutical industry

　　1范圍

　　本標準規(guī)定了醫(yī)藥工業(yè)潔凈室和潔凈區(qū)中沉降菌的測試條件、測試方法。本標準適用于醫(yī)藥工業(yè)潔凈室和潔凈區(qū)，無菌室或無菌區(qū)域（包括潔凈工作臺）的沉降菌的測定和環(huán)境的驗證。
　　2引用標準
   　下列標準所飲食的條文，通過在本標準中引用而構(gòu)成為本標準的條文。本標準出版時，所示版本均為不效。所有標準都會被修訂，使用本標準的各方應(yīng)探討使用下列標準最新版本的可能性。 YY/T0188、6－1995藥品檢驗操作規(guī)程第6部分：藥品生物測定法
　　3定義 本標準采用下列定義。
    3.1潔凈室（區(qū)） clean room（area）
　3. 2潔凈工作臺cleaning work station 一種工作臺或者與之類似的一個封閉圍檔工作區(qū)。其特點是自身能夠供給經(jīng)過過濾的空氣或氣體，如垂直層流置、水平層流罩、垂直層流潔凈工作、水平層流潔凈工作臺、自凈器等。
　3.3潔凈度 cleanliness 潔凈環(huán)境內(nèi)單位體積空氣中含大于或等于某一粒徑的懸浮粒子的允許統(tǒng)計數(shù)。
    3. 4菌落colony forming units 細菌培養(yǎng)后，由一個或幾個細菌繁殖而形成的一細菌集落，簡稱CFU。通常用個數(shù)表示。　　    3.5沉降菌 settling microbe 用本標準提及的方法收集到的活微生物粒子，通過專用的培養(yǎng)基，在適宜的生長條件下繁殖到可見的菌落數(shù)。
    3.6懸浮粒子 ailborne Paritical 可懸浮在空氣中的尺寸一般在0、001μm~1000μm之間的固體、液體或兩者的混合物質(zhì)，包括生物性粒子和非生物性粒子。
　3.7單向流 unidirectional air flow（曾稱為層流laminar flow）沿著平行流線，以單一通路以一定流速向流動的氣流。　　
    3.8非單向流水線 nonunidirectional air flow（曾稱為亂流turbulent flow）具有多個循環(huán)特性或氣流方向不平行的，不滿足單向流定義的氣流。
　3.9靜態(tài)測試 at-rest test 　　潔凈室凈化空氣調(diào)節(jié)系統(tǒng)已處于正常運行狀態(tài)，工藝設(shè)備已安裝，潔凈室內(nèi)沒有生產(chǎn)人員的情況下進行的測試。
    3.10動態(tài)測試 operational test 　　潔凈室已處于正常生產(chǎn)狀態(tài)下進行的測試。

4 測試方法
    4. 1方法概述本測試方法采用沉降法，即通過自然沉降原理收集在空氣中的生物粒子于培養(yǎng)基平皿，經(jīng)若干時間，在適宜的條件下讓其繁殖到可見的菌落進行計數(shù)，以平板培養(yǎng)皿中的菌落數(shù)來判定潔凈環(huán)境內(nèi)的活做生物數(shù)，并以此來評定潔凈室的潔凈度。
　4、2所用的儀器和設(shè)備
    4、2、1高壓消毒鍋 使用時應(yīng)嚴格按照儀器說明書操作。
    4、2、2恒溫培養(yǎng)箱 必須定期對培養(yǎng)箱的溫度計進行檢定。
　4、2、3培養(yǎng)皿 一般采用?90mm×15mm的棚硅酸玻璃培養(yǎng)皿。
　4、2、4培養(yǎng)基　　普通肉湯瓊脂培養(yǎng)基或其他藥典認可的培養(yǎng)基。其配制方法見附錄A（標準的附錄）
　4、3測試步驟
　4、3、1采樣方法 將已制備好的培養(yǎng)皿按5    、4、1、2的要求放置打開培養(yǎng)皿蓋使培養(yǎng)基表面暴露0、5h，再將培養(yǎng)皿蓋蓋上后倒置。
　4、3、2培養(yǎng)
　4、3、2、1全部采樣結(jié)束后，將培養(yǎng)皿倒置于恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
　4、3、2、2在30~35度培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，時間不少于48小時。
　4、3、2、3每批培養(yǎng)基應(yīng)有對照試驗，檢驗培養(yǎng)基本身是否污染。可每批選定3只培養(yǎng)皿作對照培養(yǎng)。
　4、3、3菌落計數(shù)
　4、3、3、1用肉眼直接計數(shù)，標記或在菌落計數(shù)器上點計，然后用5~10倍放大鏡檢查，有否遺漏。
　4、3、3、2若培養(yǎng)皿上有2個或2個以上的菌落重疊，可分辨時仍以2個或2個以上菌落計數(shù)。
　4、4注意事項
　4、4、1測試用具要作滅菌處理，以確保測試的可靠性、正確性。
　4、4、2采取一切措施防止人為對樣本的污染。
　4、4、3對培養(yǎng)基、培養(yǎng)條件及其他參數(shù)作詳細的記錄。
　4、4、4由于細菌種類繁多，差別甚大，計數(shù)時一般用透射光于培養(yǎng)血背面或正面仔細觀察，不要漏計培養(yǎng)皿邊緣生長的菌落，并須注意細菌菌落與培養(yǎng)基沉淀物的區(qū)別，必要時用顯微鏡鑒別。
　4、4、5采樣前應(yīng)仔細檢查每個培養(yǎng)皿的質(zhì)量，如發(fā)現(xiàn)變質(zhì)、破損或污染的應(yīng)剔除。

    5   測試規(guī)則
    5、1測試狀態(tài)
    5、1、1沉降菌測試前，被測試潔凈室的溫濕度須達到規(guī)定的要求，靜壓差、換氣次數(shù)、空氣流速必須控制在規(guī)定值內(nèi)。　　
    5、1、2沉降菌測試前，被測試潔凈室已經(jīng)過消毒。
　5、1、3測試狀態(tài)有靜態(tài)或動態(tài)兩種，測試狀態(tài)的選擇必須符合生產(chǎn)的要求，并在報告中注明測試狀態(tài)。
　5. 2測試人員
　5、2、1測試人員必須穿戴符合環(huán)境潔凈度級別的工作服。
    5、2、2靜態(tài)測試時，室內(nèi)測試人員不得多于二人。
　5、3測試時間
　5、3、1對單向流，如100級凈化房間及層流工作臺，測試應(yīng)在凈化空調(diào)系統(tǒng)正常運行不少于10min后開始。
　5、3、2對非單向流，如10000級、100000級以上的凈化房間，測試應(yīng)在凈化空調(diào)系統(tǒng)正常運行不少于30min后開始。　　
    5、4沉降菌計數(shù)
    5、4、1采樣點數(shù)目及其布置
　5、4、1、1最少采樣點數(shù)目　　沉降法的最少采樣點數(shù)可按表1確定。　　表1最少采樣點數(shù)目　面積 m² 　潔凈度級別 　100 　10000 　1000000 　<10 　2~3 　2 　2 　≥10～<20 　4 　2 　2 　≥20～<40 　8 　2 　2 　≥40～<100 　16 　4 　2 　≥100～<200 　40 　10 　3 　≥200～<400 　80 　20 　6 　≥400～<1000 　160 　40 　13 　≥1000～<2000 　800 　200 　63 　　注：表中的面積，對于單向流潔凈室，是指送風(fēng)面面積。對于非單向流潔凈室是指房間的面積。 在滿足最少測點數(shù)的同時，還宜滿足最少培養(yǎng)皿數(shù)，見表2。表2最少培養(yǎng)皿　潔凈度級別 　所需90mm培養(yǎng)皿數(shù)（以沉降0、5小時計） 　100 　14 　10000 　2 　1000000 　2 　　
    5、4、1、2采樣點的布置　　采樣點的位置可以同懸浮粒子測試點。
　　A. 工作區(qū)采樣點的位置離地0、8~1、5m左右（略高于工作面）。
　　B. 可在關(guān)鍵設(shè)備或關(guān)鍵工作活動范圍處增加采樣點。 　　采樣點位置的詳細規(guī)則見附錄B（標準的附錄）。
　5、5記錄　　測試報告中應(yīng)記錄房間溫度、相對濕度、壓差及測試狀態(tài)。　　測試報告的編寫見附錄C（標準的附錄）。　　
    5、6結(jié)果計算
　5、6、1用計數(shù)方法得出各個培養(yǎng)M的菌落數(shù).
　5、6、2平均菌落數(shù)的計算，見式（1）。平均菌落數(shù)M=M1+M2+…Mn／n 式中：M-平均菌落數(shù)；　　M1-1號培養(yǎng)皿菌落數(shù)；　　M2-2號培養(yǎng)血菌落數(shù)；　　Mn-n號培養(yǎng)皿菌落數(shù)；　　n-培養(yǎng)血總數(shù)。
　5、7結(jié)果評定 用平均菌落數(shù)判斷潔凈室空氣中的微生物。
　5、7、1潔凈室內(nèi)的平均菌落數(shù)必須低于所選定的評定標準。
　5、7、2若某潔凈室內(nèi)的平均菌落數(shù)超過評定標準，則必須對此區(qū)域先進行消毒，然后重新采樣兩次，測試結(jié)果均須合格。