(膠體金法)生產工藝規程模板--乙型肝炎病毒表面抗體檢測試劑（膠體金法）生產工藝規程 

1.  適用范圍

適用于乙型肝炎病毒表面抗體檢測試劑盒（膠體金法）的生產和質量控制。

2.  職責

研發部：制定本規程。

生產管理部：執行本規程

質量管理部：按本規程執行，監督本規程的執行情況。

3.  內容

3.1.依據

《乙型肝炎病毒表面抗體檢測試劑（膠體金法）》產品標準

3.2.產品名稱、劑型、規格

3.2.1名稱：

(1) 商品名：乙型肝炎病毒表面抗體檢測試劑（膠體金法）

（2）英文名：Diagnostic Kit for Antibody to Hepatitis B Surface Antigen(Colloidal Gold Immunochromatagraphic Assay)

（3）漢語拼音名：Yixing Ganyan Bingdu Biaomian Kangti Jiance  Shiji（jiaotijin  Fa）

3.2.2.類型：三類6840體外診斷試劑。

3.2.3.規格：100T/盒(25T/筒*4筒)（無卡）；25袋/盒（1支/袋）、50袋/盒（1支/袋）

3.3.產品概述

乙型肝炎病毒表面抗體檢測試劑（膠體金法）采用膠體金免疫層析分析原理、雙抗原夾心法，在玻璃纖維紙上預包埋金標記重組乙型肝炎病毒表面抗原，在硝酸纖維素膜上檢測線（T）和質控線（C）分別包被重組的乙型肝炎病毒表面抗原和羊抗兔IgG。當檢測樣本為陽性時，樣本中的乙肝病毒表面抗體與膠體金標記的重組乙肝病毒表面抗原結合形成復合物，由于層析作用復合物沿紙條向前移動，經過檢測線（T）時與預包被的重組乙肝表面抗原反應，形成免疫復合物而顯現紅色條帶，游離金標記的兔IgG則在質控線（C）與羊抗兔IgG結合顯現紅色條帶。陰性樣本則僅在質控線（C）顯色。

3.4.試劑盒組成、儲存、有效期

3.4.1.試劑盒組成：

3.4.2儲存條件：2-30℃保存。

3.4.3.有效期：24個月。

3.5.生產工藝流程圖文件末（23頁）。

3.6.生產工藝過程及工藝條件

3.6.1配液

根據以下各配方，按各相關試劑配制作業指導書進行配制。

（1）     

（2）     

（3）     

3.6.2樣品稀釋液分裝

按照《液體分裝作業指導書》，根據相應規格的裝量要求進行分裝，分裝量＝ 規格 + 附加量。如下表所示（單位：ml/瓶）：

3.6.3 膠體金制備

（1）    量取   ml超純水到適當大小的燒瓶中；

（2）    量取    ml燒金溶液A并加入燒瓶中；

（3）    水沸騰后，加入已經平衡的燒金溶液B    ml；

（4）    水繼續沸騰5分鐘關閉加熱攪拌器，并將燒瓶移至桌面，用鋁箔紙蓋住瓶口，讓膠體金自然冷卻。

（5）    膠體金的儲存：2～8℃；有效期6個月。

3.6.4膠體金標記

3.6.4.1根據試樣驗證結果，量取膠體金，快速攪拌中加入0.2MK₂CO₃液，混勻后，快速攪拌中加入相應量的乙肝抗原或兔IgG(乙肝抗原和兔IgG分開標記)，混合均勻后，反應30分鐘。

3.6.4.2 終止：充分反應后在攪拌中加入金標記過程終止液（20ul/1ml金溶液）；繼續攪拌30分鐘直至混勻。

3.6.4.3將膠聯溶液離心，9000轉離心6分鐘，收集沉淀并用金工作液定容至總體積的1/10；

3.6.4.4儲存： 2～8℃，有效期6個月。

3.6.5  鋪金液配制

3.6.5.1用工作液將1/10體積的乙肝病毒表面抗原金標記物沉淀放大10倍；兔IgG金標記物沉淀按1/3乙肝病毒表面抗原沉淀的量，加至上述乙肝金標工作液中（即兔IgG金標記物沉淀為乙肝的1/3）

3.6.5.2按0.2mg/ml的量加入抗RBC到鋪金液中；

3.6.6 小樣試驗：在鋪金和劃膜之前，應首先將待鋪的基因重組抗原-膠體金復合物溶液，先鋪一條玻纖（6mm×310mm）上，用配好的質控線液、檢測線液劃膜一張，與其他組分組合在一起，進行檢測，要求：

陰性參考品符合率：20份陰性參考品符合率（-/-）應為20/20。

靈敏度：靈敏度參考血清，呈陽性反應。

精密性：連續重復測定精密性參考品10次，反應結果應均為陽性，且顯色度均一。

3.6.7 鋪金

3.6.7.1按每張玻纖可以鋪金36ml計算金標液的體積

3.6.7.2按計算好的體積在每張玻纖上鋪金，并用圓形試管刮均勻。

3.6.7.3 30%濕度以下，37～40℃干燥18～24小時，如不立即使用，加干燥劑鋁箔袋封存。

3.6.7.4儲存：保存過程中嚴格防潮，以后打開和使用一定要在30%濕度以下。

3.6.7膜包被

按照《劃膜機標準操作規程》，以“252”泵速（對應速度2.7ul/cm），將質控線液和檢測線液均勻地劃在膜上，質控線劃在距膜頂端12.1±0.1cm處，檢測線劃在距膜頂端12.5cm±0.1cm處，質控線與檢測線相距5mm±1mm。

3.6.7.2  30%濕度以下，37～40℃干燥18～24小時，如不立即使用，加干燥劑鋁箔袋封存。

3.6.7.3儲存：保存過程中嚴格防潮，以后打開和使用一定要在30%濕度以下。

3.6.8 樣品墊的準備

3.6.8.1按每張玻纖可以鋪液36ml計算全血樣品墊處理液的體積

3.6.8.2按計算好的體積在每張玻纖上鋪液，并用圓形試管刮均勻。

3.6.8.3 30%濕度以下，37～40℃干燥18～24小時，如不立即使用，加干燥劑鋁箔袋封存。

3.6.8.4儲存：保存過程中嚴格防潮，以后打開和使用一定要在30%濕度以下。

3.6.9半成品檢測：以上生產出來的膠體金、膠金墊、包被膜、分裝好的樣品稀釋液均應作為半成品請檢，質量管理部QC按照《半成品檢驗作業指導書》檢驗合格方可進入下一道工序。

3.6.10 組裝

3.6.10.1 按照《貼膜組裝工序作業指導書》的規定，將包被好的NC膜貼在塑料大卡上。 3.6.10.2各組成部分的切割：各組分用切割機切割成以下大小：

金標墊：6mm × 310mm    樣品墊：15mm ×310mm     吸水墊：20mm×310mm

不干膠紙：13mm× 310mm

3.6.10.3 層壓

將上述切割好的材料進行貼膜制成乙型肝炎表面抗體膠體金試紙條，各膜層疊關系如下：

1）   不干膠紙

2）   樣品墊

3）金結合物墊     

4）包被有檢測線（T線）和質控線（C線）的硝酸纖維素膜

5）吸水墊

6）塑料襯片

3.6.10.4 層壓參數

金標墊2片，第一片搭上NC膜2mm， 第二片搭第一片3mm ；樣品墊15mm，搭上金標墊2mm；吸水墊20mm，搭上NC膜2mm，不干膠13mm，搭上露出的NC膜2mm。   

3.6.11切條

（1）組裝環境條件的控制在相對濕度30%以下，并所有組件拆封后暴露于空氣中時間不超過2小時。

（2）按照《切條工序作業指導書》使用切條機，將組裝好的乙肝病毒表面抗體檢測試劑切割成寬度為2.5mm±0.1mm試條，切條過程中應于前、后及過程中每30分鐘對切條的寬度檢查一次。

3.6.12檢測卡的裝配

按照不同規格的要求，需要進行檢測卡裝配的試紙條先把切好的試條裝配到完好的PVC卡中，再用壓卡機進行壓卡，裝條時應注意檢查條有無劃痕污漬，寬度是否符合要求；PVC卡外觀應清潔，平整，無變形，底面配套性好，壓卡應注意調節松緊度，避免將卡壓破或變形。

3.6.13內包裝

3.6.13.1  成品規格為25支/盒、50支/盒的，所對應半成品的內包裝：

（1）裝卡：單個卡和無水硅膠干燥劑一起放入鋁箔袋中，卡印字方向應朝向鋁箔袋開口方向，確保無漏裝。

（2）密封。密封時應檢查密封的效果及鋁箔袋上的效期印字是否正確，使用封口機進行封口。

3.6.13.2  成品規格為100支/盒的，所對應半成品的內包裝

裝筒，將無卡試紙以25支/筒的規格裝入筒中，放入干燥劑，然后封筒。

3.6.14 外包裝

（1）不干膠標簽批號、生產日期、有效期打印：以試紙條組裝日期為“生產日期”，并由此推算出“有效期至”，批號按照《批號管理規程》的規定設置。按照《批號打印機使用、清潔、維護、保養標準操作規程》進行操作打印標簽、包裝盒上的“三期”。

（2）貼簽：在上述裝好檢測卡的鋁箔袋及裝好試紙條的筒上貼上標簽。

（3）成品組裝：

紙盒內組份：

按包裝盒標準折疊方法折好包裝盒，根據成品組分名稱、規格及數量，分別裝入檢測卡鋁箔袋或試紙筒、樣品稀釋液、說明書。包裝組組長每盒清點查看，合格后用封口簽（合格證）封口。

（4）儲存：2～30℃，有效期24個月。

3.6.15.成品檢定：抽檢量為3%，最小抽檢量為500人份。經質量管理部QC檢測合格，QA做生產記錄審核后開具《成品放行審核單》方可入庫。

3.7 質量標準

3.7.1.主要原輔料質量標準及依據：

（1）重組乙肝抗原

（2）兔IgG抗體

（3）羊抗兔IgG

（4）兔抗RBC

（6）    硝酸纖維素膜：Millipore  Hiflow  Plus  18002硝酸纖維素膜

（7）    玻璃纖維紙

3.7.2半成品質量標準：

（1）膠體金

（2）膠金墊

（3）包被膜

（4）樣品稀釋液

3.7.3成品質量標準：

3.8.質量控制

3.8.1.主要質量控制點：

按生產工序和工藝特點規定生產過程中的主要質量控制點，如下表所示：

3.8.2.監控頻次

每個質量控制點均應在該工序生產操作開始前、操作過程中、操作結束后進行三次監控，對于用時較長工序需適當增加監控頻次。

3.8.3.監控方法

(1) 生產前，檢查人員、設備、物料、環境是否符合工藝標準，并達到相應衛生要求，檢查結束后決定是否準許開始生產。

(2) 檢查物料名稱、級別、數量、外觀、狀態標識、存放條件是否符合工藝要求和生產規模，原輔料、包裝材料及半成品的質量是否符合要求。

(3) 檢查設備、儀器、器具是否有狀態標識，處于清潔、完好狀態。

(4) 各相關的記錄、憑證是否齊全，生產過程中的記錄是否完整、規范。

(5) 檢查生產工藝規程和崗位標準操作規程的執行情況，生產現場是否有序、規范。

(6) 在質量控制點工序的操作過程中實行雙人核對，QA對生產全過程進行監督。

3.8.4.重點工序的監控

(1) 定量配料、定額包裝是保證產品質量的關鍵工序，對物料質量、投料量是否符合要求實施重點監控。

(2) 生產環境（潔凈度、溫度、濕度、壓差）是否達標是保證生產的標準化和合格率的基本條件，實施重點監控。

(3) 所有半成品生產完畢后分別取樣進行質量檢測，對半成品質量是否符合質量標準實施重點監控。

(4) 對包裝過程中的批號和有效期打印、包裝數量、包裝材料使用實施重點監控。

3.9.主要生產設備一覽表

3.10.技術經濟指標的計算

3.10.1.最低生產量：

根據產品特點和生產能力確定本產品的最低生產量1萬條

3.10.2.物料消耗定額標準：

根據1萬條/批的最低生產量制定物料消耗定額標準，并以該標準作為批生產物料需求統計、經濟技術指標和物料平衡計算的依據。

(1)主要原輔料的消耗定額標準：

根據各種試劑批制備量的確定方法，計算主要原輔料的消耗定額標準（如下表所示）。

3.10.2.包裝材料的消耗定額（按1萬人份量核算）：

3.11.物料平衡檢查和收率計算

3.11.1.定義：

(1)物料平衡：指產品或物料的實際產量（或用量）與理論產量（或用量）之間的百分比，可適當考慮可允許的偏差范圍。

 (2)收率：指半成品、成品的實際產量（或合格品產量）與理論產量（或投料量）之間的百分比，可適當考慮可允許的偏差范圍。

(3)理論產量：指按照所用的原料、輔料、包裝材料量，在生產中無任何損失或差錯

的情況下產出的最大數量。

 (4)實際產量：指生產過程中的實際產出量，包括產出的合格品量、檢驗品量。

3.11.2.物料平衡和收率計算方法：

(1)物料平衡 ＝ 實際產量（用量）／理論產量（用量）× 100%

(2)收率 = 合格品產量 / 理論產量 × 100%（可考慮適當偏差范圍）。

3.11.3.關鍵工序的收率范圍：

3.12.工藝衛生

按以下衛生管理規程和相關標準操作規程執行：

3.13.生產安全和勞動保護

    按以下管理規程執行：

3.14.勞動組織與生產崗位定員

按《組織機構管理規程》、《員工培訓管理規程》、《人員健康管理規程》執行。

3.15.環境保護

按《廠區環境衛生管理規程》、《“三廢”管理規程》執行。

4.  附件

4.1.STP-08-3-001-R01-01《批生產記錄》

4.2.STP-08-3-001-R02-01《批分裝記錄》

4.3.STP-08-3-001-R03-01《批包裝記錄》

4.4. 《膠體金工藝流程圖》

各膜層疊關系如下：

3）   不干膠紙

4）   樣品墊

3）金結合物墊     

4）包被有檢測線（T線）和質控線（C線）的硝酸纖維素膜

5）吸水墊

6）塑料襯片

3.4.1.某金標試劑盒組成：