化學發光法主要生產工藝
一、原理
化學發光免疫分析(chemiluminescence immunoassay，CLIA)，是將具有高靈敏度的化學發光測定技術與高特異性的免疫反應相結合，用于各種抗原、抗體、激素、酶、脂肪酸、維生素和藥物等的檢測分析技術。化學發光免疫分析包含兩個部分，即免疫反應系統和化學發光分析系統。免疫反應系統是將發光物質(在反應劑激發下生成激發態中間體)直接標記在抗原或抗體上，或酶作用于發光底物。化學發光分析系統是利用化學發光物質經催化劑的催化和氧化劑的氧化，形成一個激發態的中間體，當這種激發態中間體回到穩定的基態時，同時發射出光子，利用發光信號測量儀器測量光量子產額，該光量子產額與樣品中的待測物質的量成正比，由此可以建立標準曲線并計算樣品中待測物質的含量。
二、化學發光免疫分析的類型
（一）化學發光標記免疫分析
化學發光標記免疫分析又稱化學發光免疫分析(CLIA)，是用化學發光劑直接標記抗原或抗體的免疫分析方法。常用于標記的化學發光物質有吖啶酯類化合物(AE)。
（二）化學發光酶免疫分析
從標記免疫分析角度，化學發光酶免疫分析(CLEIA)，應屬酶免疫分析，只是酶反應的底物是發光劑，操作步驟與酶免分析完全相同：以酶標記生物活性物質（如酶標記的抗原或抗體）進行免疫反應，免疫反應復合物上的酶再作用于發光底物，在信號試劑作用下發光，用發光儀進行發光測定。目前常用的標記酶為辣根過氧化物酶(HRP)和堿性磷酸酶(ALP)，它們有各自的發光底物。
（三）時間分辨熒光免疫分析(TRFIA)
是用三價稀土離子及其螯合劑作為示蹤物，如銪（Eu3+）、鋱（Te3+）及釤（Sm3+）、鏑（De3+）等代替傳統的熒光物質、放射性同位素、酶和化學發光物質，來標記抗體、抗原、多肽、激素、核酸探針或生物活性細胞，待反應體系發生后，用時間分辨熒光儀測定最后產物中的熒光強度，根據熒光強度和相對熒光強度比值，判斷反應體系中分析物的濃度，達到定量分析的目的。
（四）電化學發光免疫分析(ECLIA)
是電化學發光(ECL)和免疫測定相結合的產物，是一種在電極表面由電化學引發的特異性化學發光反應，包括了電化學和化學發光二個過程。ECL 反應底物有兩種：三氯聯吡啶釕[Ru(bpy)3]2+、絡合物三丙胺(TPA)。
三、主要生產工藝（以微孔板載體的化學發光酶免疫分析為例進行描述）
（一）固相載體的制備
1．包被板的準備
準備經檢驗合格的包被板，記錄批號、數目、狀態標識。
常規質控項目：尺寸，外觀，包裝。
2．包被液的配制
配制包被緩沖液，加入包被的抗體或抗原至工作濃度，混合均勻，即成所需的包被液，工作濃度的包被液應在規定時間內使用。
常規質控項目：包被緩沖液配方，pH值，包被物成份。
3．包被板的包被
包被液按工藝要求加入包被板。記錄所包被的包被板數量。
常規質控項目：包被體積，溫度，時間，過程監控。
關鍵設備：包被機、精密天平、加樣器。
4．洗板工作液的配制（按各單位工藝要求，可以不洗板）
按配方配制洗板工作液。
常規質控項目：洗板工作液配方，pH值。
5．封閉液的配制
按配方配制封閉液。
常規質控項目：封閉液配方，pH值。
6．洗板和封閉
包被完成后，抽去孔內包被液，用洗板工作液洗板后（按各單位工藝要求，可以不洗板），加入封閉液。
常規質控項目：封閉體積，溫度，時間，過程監控。
質檢項目：封閉前檢驗包被均一性。
關鍵設備：包被機、（洗板機）、精密天平、加樣器。
7．抽干
封閉后的反應板，抽干孔內液體。
常規質控項目：過程監控。
8．干燥
反應板應按工藝的要求進行干燥。
常規質控項目：溫度，濕度，時間，過程監控等。
9．密封包裝
將干燥后的反應板用鋁箔袋密封包裝，內放干燥劑（按各單位工藝要求，可以不放）。
常規質控項目：密封性能，標示及效期等。
10．反應板（半成品）檢驗
對裝袋密封后的反應板進行抽樣檢驗，外觀、板內變異、板間變異。
關鍵設備：真空包裝機。
（二）滴配過程
1．酶結合物（也稱酶標記物）的制備（根據各產品實際情況，該步驟可不進行）
采用常規過碘酸鈉——乙二醇法將相關的抗體（或抗原）標記辣根過氧化物酶（或其他酶），酶標記后的抗體（或抗原）應加入適當的保護劑保存于低溫。
常規質控項目：標記方法，過程控制。
2．酶結合物的鑒定
（1）功能性實驗
將酶結合物用酶稀釋液稀釋后，用于產品的滴配，其結果應符合相關試劑盒的質量標準。
（2）穩定性
將酶結合物用酶稀釋液稀釋，進行2～8℃，及熱穩定性實驗，滴配結果應符合相關試劑盒的質量標準。
3．酶結合物稀釋液
按酶結合物稀釋液的配方配制，存放在2～8℃保存，并于規定時間內使用。
常規質控項目：酶結合物稀釋液配方，pH值。
4．酶結合物工作濃度的滴配
取酶結合物，用酶結合物稀釋液稀釋到不同的濃度，用已制備好的反應板進行滴配。測定系列標準品及相應的質控品，確定使體系達到最優的酶結合物工作濃度。
5．酶結合物工作液配制
將所需量酶結合物和酶結合物稀釋液按滴配濃度混合均勻。
質檢項目：分裝前檢驗，用配套的反應板進行檢驗，外觀、靈敏度、質控品測定值、定量產品應作校準品線性檢測。
6．酶結合物工作液的分裝
按工藝要求分裝酶結合物工作液。
常規質控項目：分裝前確認試劑名稱、批號、數量，分裝量，封裝后密封性。
7．酶結合物工作液（半成品）檢驗
對分裝后的酶結合物工作液進行抽樣檢驗，外觀、分裝量、靈敏度、校準品劑量-反應曲線線性、質控品測定值。
（三）校準品、陰/陽性對照或質控品的制備
1．稀釋液
按稀釋液的配方配制，存放在2～8℃或-20℃保存，并于有效期內使用。
常規質控項目：稀釋液配方，pH值。
2．校準品、陰/陽性對照的配制
校準品、陰/陽性對照品的配制應具有量值溯源性，可參照國家標準品、WHO標準品或其他級別的標準物質進行配制。
質檢項目：分裝前檢驗，準確性、劑量－反應曲線線性（定量產品）、質控品測定值。
3．校準品、陰/陽性對照或質控品的分裝
按工藝要求分裝校準品、陰/陽性對照或質控品。
常規質控項目：分裝前確認試劑名稱、批號、數量，分裝量。
4．校準品、陰/陽性對照或質控品（半成品）檢驗
對分裝后的校準品、陰/陽性對照或質控品進行抽樣檢驗，外觀、分裝量、準確性、劑量－反應曲線線性（定量產品）、質控品測定值。
（四）化學發光底物的制備
1．底物緩沖液
按底物緩沖液的配方配制，存放在2～8℃保存，并于有效期內使用。
常規質控項目：底物緩沖液配方，pH值。
2．化學發光底物（氧化劑和發光劑）的配制
分別按氧化劑和發光劑的配方在底物緩沖液中加入相應的氧化劑和發光劑
常規質控項目：氧化劑和發光劑配方。
質檢項目：分裝前檢驗，本底、發光強度。
3．化學發光底物（氧化劑和發光劑）的分裝
按工藝要求分裝化學發光底物（氧化劑和發光劑）。
常規質控項目：分裝前確認試劑名稱、批號、數量，分裝量，封裝后密封性。
4．化學發光底物（半成品）檢驗
對分裝后的化學發光底物進行抽樣檢驗，外觀、分裝量、本底、靈敏度、發光強度。
（五）分裝、燈檢和貼簽
分裝量用減重稱量法進行測量，把質量換算成體積后進行分裝量的控制。燈檢是目測檢查各組分的色澤、分裝量以及是否混濁、有雜質等。
（六）包裝
根據試劑盒包裝SOP要求及說明書的要求，以流水線操作形式進行包裝。包裝時應嚴格檢查品名、批號、裝量，認真核對各物料數量，并在關盒前進行復核。